99蜜桃在线观看免费视频网站,人妻熟人中文字幕一区二区,欧美深度肠交惨叫,98国产精品综合一区二区三区

歡迎訪問蘇州匯通色譜分離純化有限公司網(wǎng)站!
服務(wù)熱線18912623027
News新聞動態(tài)
首頁 > 新聞動態(tài) > 蛋白層析柱高效使用與精準(zhǔn)維護(hù)攻略

蛋白層析柱高效使用與精準(zhǔn)維護(hù)攻略

更新時間:2025-06-26瀏覽:30次

蛋白層析柱高效使用與精準(zhǔn)維護(hù)攻略
一、裝柱與平衡階段注意事項  
層析柱預(yù)處理  
清潔與滅菌:使用前,用去離子水沖洗柱管及配件,去除雜質(zhì);需滅菌時,采用高壓蒸汽滅菌(121℃,20分鐘)或乙醇浸泡(75%乙醇,≥30分鐘),確保無菌環(huán)境。  
墊片與篩板檢查:檢查篩板是否平整、無破損,墊片需緊密貼合柱壁,避免漏液或蛋白泄漏。  
填料裝填技巧  
填料預(yù)處理:根據(jù)說明書,用緩沖液平衡填料(如Sepharose需懸浮于20%乙醇),去除氣泡并調(diào)整至合適濃度(如10-50%懸浮液)。  
裝柱方法:  
采用“濕法裝柱”,緩慢倒入填料,避免分層或氣泡。  
裝填后用緩沖液輕柔沖洗,流速≤1ml/min(小柱)至≤10ml/min(大柱),直至基線平穩(wěn)(UV280nm吸收值≤0.01AU)。  
平衡條件優(yōu)化  
緩沖液選擇:與樣品緩沖液成分一致(如pH、離子強(qiáng)度),避免蛋白沉淀或變性。  
平衡體積:至少5倍柱體積(CV),復(fù)雜填料(如離子交換)需10-15倍CV,確保填料表面電荷或配基充分平衡。  
 

 

二、蛋白層析柱上樣與洗脫階段注意事項  
樣品預(yù)處理  
澄清過濾:樣品需經(jīng)0.22μm或0.45μm濾膜過濾,去除顆粒物,防止堵塞篩板。  
濃度與體積:上樣量≤填料動態(tài)結(jié)合載量(如DEAE填料蛋白載量10-50mg/ml),體積≤5%柱體積,避免過載導(dǎo)致峰形展寬。  
流速與壓力控制  
操作壓力:維持柱壓≤0.3MPa(常規(guī)柱),壓力驟升(>0.5MPa)需立即停泵,檢查是否堵塞。  
流速優(yōu)化:  
分子篩層析:流速0.5-2ml/min(小柱),保持線性流速≤150cm/h。  
離子交換/親和層析:流速1-5ml/min,平衡與洗脫流速需一致。  
洗脫策略  
梯度洗脫:離子交換層析采用線性鹽梯度(如0-1MNaCl),親和層析用競爭性洗脫液(如咪唑、甘氨酸),需預(yù)實驗確定最佳梯度。  
收集管理:按峰收集,每管體積≤1/10柱體積,合并主峰并檢測蛋白濃度(如Bradford法)。  
三、清洗與再生注意事項  
常規(guī)清洗  
緩沖液沖洗:每次運(yùn)行后,用2-3倍CV起始緩沖液沖洗,去除殘留蛋白。  
高鹽清洗:離子交換柱用1-2MNaCl沖洗,去除非特異性結(jié)合蛋白。  
深度再生  
酸堿處理:  
離子交換柱:0.1-0.5MNaOH(堿性填料)或0.1-1MHCl(酸性填料),浸泡30分鐘至2小時。  
親和柱:根據(jù)配基特性選擇(如His標(biāo)簽柱用0.1MEDTA解離金屬離子)。  
有機(jī)溶劑清洗:疏水層析柱可用20-50%乙醇沖洗,去除脂類或疏水性雜質(zhì)。  
消毒與保存  
消毒:長期存放前,用0.02%疊氮鈉或20%乙醇沖洗并保存,防止微生物污染。  
凍存:特殊填料(如抗體親和柱)可凍存于-20℃(含50%甘油),但需驗證填料穩(wěn)定性。  
四、蛋白層析柱常見問題與避坑指南  
峰形異常處理  
拖尾峰:可能原因包括填料過載、流速過快或柱效下降。解決方法:減少上樣量、降低流速或更換新柱。  
肩峰或分裂峰:填料不均一或樣品聚集導(dǎo)致。解決方法:重新裝柱或優(yōu)化樣品緩沖液(如添加助溶劑)。  
柱效下降應(yīng)對  
柱壓升高:篩板堵塞時,反向沖洗(低流速)或更換篩板;填料壓實則需重新裝柱。  
分辨率降低:填料老化需更換,或優(yōu)化緩沖液條件(如pH、離子強(qiáng)度)。  
蛋白損失預(yù)防  
非特異性吸附:增加平衡體積或添加非離子去污劑(如0.05%Tween-20)。  
機(jī)械泄漏:定期檢查柱接頭、墊片,緊固或更換密封件。

 

上一篇:沒有了
欧美激情精品久久久久久| 散装肉脯(h)海棠书屋| 五月丁香社区| 久久精品国产一区二区三区| 边吃奶边被躁欧美三级| 12—13女人做a片| 两个人做人爱视频免费| 餐桌下狂c亲女水欧阳凝| 亚洲暴爽av天天爽日日碰| 特黄做受又粗又大又硬老头| 熟睡中の姉侵犯在线播放| 乱lun合集1第40部分阅读| sm调教论坛一区| 400部精品国偷自产在线| 国内最真实的xxxx人伦| 天堂网在线观看| 99久久99久久精品免费看蜜桃| 精品少妇人妻av一区二区三区| 艳mu1一6全集在线播放| 超碰97免费人妻| 国产午夜av无码无片久久96| 乳妓h军妓调教hh文| 日本人妻a片成人免费看| www国产精品内射老熟女| 富婆被大肉楱征服小说| 无遮挡100禁图片| 国产精品久久一区二区三区| 免费一对一真人视频app| 我和小堂妺的第一次| 青青草视频在线观看| 成熟护士长的蚌肉的滋味| 在线观看国产一区二区三区| 扒开老女人毛耸耸视频| csgo未满十八岁能玩多久| ysl千人千色t9t9t9| 亚洲av无码乱码在线观看无码| 午夜精品国产精品大乳美女| 老赵揉着粉嫩的双乳| 国产麻豆精品一区二区三区 | 公车被奷到高潮突然停下| 奇米777狠狠888俺也去|